摘要： 为建立禽偏肺病毒（aMPV）的间接免疫荧光检测方法（IFA），试验采用原核表达系统表达aMPV的F蛋白，纯化后作为抗原免疫小鼠制备杂交瘤细胞，经Western blot、IFA反应性鉴定，其中1株杂交瘤细胞鉴定合格，用这株细胞免疫小鼠制备单克隆抗体；采用制备的单克隆抗体作为一抗，异硫氰酸荧光素（FITC）标记的山羊抗鼠IgG作为二抗，优化反应条件，并评估建立方法的敏感性、特异性与重复性；采用建立的方法检测禽用活疫苗，并与PCR方法比对检测结果。结果显示：制备的单克隆抗体亚型为IgG1，轻链是Kappa，纯度高于90%，Western blot和IFA检测与B亚型、C亚型aMPV反应性良好；IFA方法的优化条件为：aMPV单克隆抗体1∶400稀释，FITC标记的山羊抗鼠IgG 1∶800稀释，一抗与感染细胞在37 ℃孵育1 h；该方法最低可检出10 TCID50/0.1 mL病毒，且与其他病毒不发生反应，在试验条件相同情况下，不同时间的检测荧光强度不受影响。研究表明，试验基于aMPV单克隆抗体建立的IFA方法敏感性高、特异性强、重复性良好，该方法对禽活疫苗中外源性aMPV的检出限为10 TCID50/0.1 mL。

关键词: 禽偏肺病毒；F蛋白；禽用活疫苗；间接免疫荧光方法

中图分类号: 

• S855.3