摘要： 为高效制备禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）囊膜蛋 白gp90，试验利用PCR技术扩增获得REV流行毒株gp90基因，利用同源重组技术将该基因克 隆入真核表达载体 p19-2 构建重组真核表达质粒 p19-2-6his-peptide-gp90-12his；在转染至 293T细胞中进行表达特性初步验证后，将重组质粒转染至悬浮培养的293F细胞中进行表达制 备，采用镍柱亲和层析技术纯化分泌到细胞上清中的gp90蛋白，对其进行Western blot检测；纯 化的 gp90蛋白免疫 SPF鸡，通过检测血清抗体的情况鉴定 gp90蛋白的免疫原性。结果显示： 利用 293F细胞悬浮培养系统获得了 REV 流行毒株的囊膜蛋白 gp90的高效分泌表达，经镍柱 亲和层析技术纯化获得的重组蛋白浓度可达731.91 μg/mL，其可被REV gp90单克隆抗体特异 性识别，具有良好的反应原性；该蛋白具有良好的免疫原性，其免疫鸡后可刺激产生特异性抗 体，一免后血清抗体全部转阳，二免后血清抗体的平均ELISA效价可达7 067。研究表明，成功 利用细胞悬浮培养系统制备了具有良好反应原性和免疫原性的REV gp90蛋白，为进一步开展 REV候选疫苗及配套检测方法的研究奠定了基础。

关键词: 禽网状内皮组织增生症病毒；gp90蛋白；真核表达；293F细胞；悬浮培养

中图分类号: 

• S855.3