摘要： 为建立检测鹅圆环病毒（GoCV）抗体的间接ELISA检测方法，研究优化GoCV衣壳 蛋白（Cap）的杆状病毒表达体系，通过构建含完整Cap基因、缺失核定位信号（NLS）及以蜂毒肽 （Mel）替换NLS的三种重组毒株，以重组Cap蛋白作为包被抗原，建立间接ELISA检测方法，验证 其重复性、特异性及与实时荧光定量PCR（qPCR）的一致性，并对广东地区152份鹅血清样品进 行检测。结果显示：保留完整NLS的全长Cap（VBac-Cap）毒株可溶性表达量最高，经工艺优化后蛋 白产量达7.5 mg/L；以此重组Cap蛋白作为包被抗原，建立的间接ELISA检测方法最佳反应条 件为：抗原包被浓度 1 μg/mL，37 ℃包被 1 h，封闭条件为 5%脱脂奶粉 37 ℃封闭 1 h，血清稀释 度 1∶100，37 ℃处理30 min，二抗稀释度为1∶2 000，37 ℃处理30 min；该方法批内与批间变异系 数均小于4.5%，与新城疫病毒、小鹅瘟病毒、鹅副黏病毒、呼肠孤病毒、H5及H7亚型禽流感病毒 阳性血清均无交叉反应；该方法与实时荧光定量PCR检测结果高度一致（Kappa=0.628），对临床 血清检测的GoCV抗体阳性率为65.1%（99/152）。研究表明，试验成功建立了高效GoCV Cap蛋 白杆状病毒表达体系，揭示保留完整NLS对于获得高产量、高免疫特异性GoCV Cap蛋白的关键 作用，同时建立的间接ELISA方法具有良好的特异性与重复性，可用于GoCV临床血清学检测。

关键词: 鹅圆环病毒；Cap蛋白；杆状病毒；核定位信号；间接ELISA

中图分类号: 

• S855.3