摘要： 试验旨在设计并开发新城疫病毒（NDV）HN基因与禽偏肺病毒（aMPV）F基因双基因共表达的DNA疫苗并评估其安全性和免疫原性。研究选择两种功能性蛋白HN蛋白和F蛋白，采用反向疫苗学方法，设计了一种基于T2A肽的双基因共表达单元，命名为PRO；通过AllergenFP、ToxinPred 2、Weblogo 3、ProtScale、AlphaFold 3、PROCHECK等生物信息学工具预测并分析了其保守性、理化性质与结构；在分子对接和分子动力学模拟评估其与免疫受体的结合能力之后，利用T2A肽将HN蛋白和F蛋白进行串联，并插入载体，成功构建了重组质粒pEGFP-PRO，转染到HEK293T细胞后通过免疫印迹分析法确定目的蛋白的表达情况；在免疫模拟的基础上进行动物免疫效果以及安全性评价试验，对雏鸡采取两次免疫接种的策略，在28日龄二次免疫后检测鸡血清中特异性抗体、细胞因子和T淋巴细胞亚群比例。结果显示：设计的疫苗具有亲水性、保守性、抗原性和免疫原性，结构稳定，并能够有效结合天然免疫中的Toll样受体，优化密码子后成功构建重组真核表达载体且目的基因序列与预期一致，无明显细胞毒性并能在真核细胞中高效表达；以鸡为研究对象进行免疫接种，与对照组相比，疫苗免疫组的CD3+、CD4+和CD8a+占比以及CD3+CD4+的百分比极显著或显著上升（P<0.01或P<0.05），并且抗体水平和细胞因子水平极显著升高（P<0.01），免疫鸡未出现过敏反应且脏器无明显病理变化。研究表明，通过T2A肽成功串联NDV HN基因与aMPV F基因构建出双基因共表达DNA疫苗，其免疫鸡能有效激发体液和细胞免疫应答，结果为禽用多联DNA疫苗的研发提供了新思路。

关键词: 新城疫病毒；禽偏肺病毒；双基因共表达；DNA疫苗；免疫效果

中图分类号: 

• S855.3