摘要： 为提升番鸭成纤维细胞（DEF）的冻存与复苏质量，研究系统评估了不同浓度的胎牛血清（FBS）与二甲基亚砜（DMSO）单独或联合使用对DEF活力、增殖能力及凋亡水平的影响，并进一步引入非渗透性冷冻保护剂羟乙基淀粉（HES），以确定其适宜添加量，构建高效、低毒性的复合型冻存体系。结果显示：通过细胞形态学观察发现，含20% FBS和5% DMSO的冻存保护剂能显著提高DEF复苏后的增殖能力和形态稳定性，但过高浓度的DMSO会引起细胞凋亡；CCK-8、EdU-488细胞增殖检测及JC-1线粒体膜电位检测显示，4% HES极显著提高DEF细胞复苏后的汇合度和增殖活性（P<0.01），维持线粒体膜电位，并降低细胞凋亡水平；而高浓度HES（8%）则显著抑制细胞增殖（P<0.01），导致细胞死亡并显著增加凋亡；与单一冷冻保护剂（CPA）配方相比，复合配方更能有效地维持复苏细胞的形态稳定性及基本生物学特性，其保护作用主要源于渗透性与非渗透性CPA在抑制冰晶形成、缓解渗透压变化及改善胞外环境方面的互补效应。此外，复苏后的DEF未出现形态漂移或衰老迹象，表明该冻存体系能够减轻冻存和复苏应激造成的潜在损伤。综合结果表明，含 40% FBS、5% DMSO和4% HES的复合冻存体系在细胞存活、增殖和抗凋亡方面均具有明显优势，可作为 DEF 冻存与复苏的优选方案。

关键词: 鸭成纤维细胞；冷冻复苏；冷冻保护剂；二甲基亚砜；羟乙基淀粉

中图分类号: 

• S834