摘要： 研究旨在建立一种同时检测禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）A、J亚群和 B、K亚群的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。试验通过比对GenBank中ALV各亚群全基 因组序列，设计针对A/J（LTR区）与B/K（env基因区）亚群的特异性引物和探针，构建重组质粒 标准品建立双重 TaqMan 荧光定量 PCR 检测方法，并与常规 PCR 比较临床样本的检测效果。 结果显示：建立的方法对A/J和B/K亚群的检测限分别为10 copies/μL和102 copies/μL，灵敏度 分别比常规 PCR 提高 10 倍和 100 倍；标准曲线相关性良好（R2≥0.998），扩增效率为 93.6% 与 96.2%；该方法仅对A、B、J、K亚群ALV产生扩增信号，不与其他常见禽类病原发生交叉反应； 批内和批间变异系数（CV）均低于1%，表明建立的方法重复性良好；该方法检测100份临床样 本共检出A/J阳性样本20份、B/K阳性样本2份，阳性检出率高于常规PCR，且与ELSIA检测结 果符合率达 100%。综上所述，研究建立的方法具有高灵敏度、高特异性和良好的稳定性，适 用于临床样本的快速、精准检测，可为ALV的种群净化和流行病学监测提供可靠的技术支持。
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