摘要： 研究旨在研制抗鸡源早幼粒细胞白血病蛋白（PML）的单克隆抗体。试验采用PCR 和同源重组技术构建鸡PML基因的1 228~1 566 nt原核表达质粒，命名为pGEX-6p-1-PML-P2。 使用IPTG诱导表达后，以纯化成功的GST-PML-P2蛋白免疫小鼠，将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP2/0融合，通过间接免疫荧光（IFA）方法筛选出阳性细胞克隆；用激光共聚焦、Western blot及免 疫沉淀（IP）验证单克隆抗体的特性。结果显示：成功获得3株能够分泌抗鸡PML单克隆抗体的 杂交瘤细胞株，命名为4C2、3F4和4G3；3株单克隆抗体的亚类均为IgG1，其腹水的IFA效价分别 为 1∶6 400（4C2）、1∶12 800（3F4）和 1∶25 600（4G3）；单克隆抗体 4C2 可特异性检测禽源细胞 （HD11、MSB-1、LMH和DF-1）及非禽源细胞（MDCK、MA104和293T）中的内源性PML蛋白，激 光共聚焦可观察到DF-1细胞内源性PML蛋白在细胞核内呈点状分布；3株单克隆抗体均能有效 免疫沉淀外源高表达的鸡PML蛋白且单克隆抗体4C2能有效免疫沉淀DF-1细胞内源性的PML 蛋白，确定PML在鸡的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺及法氏囊组织中广泛表达。研究表明， 成功制备的3株抗鸡PML单克隆抗体可以有效检测不同细胞系及鸡组织中的PML蛋白并免疫沉 淀细胞中内源及外源表达的PML蛋白，为深入探究鸡PML蛋白的功能及其在禽类疾病防控中的 应用提供了不可或缺的工具。

关键词: 鸡；早幼粒细胞白血病蛋白；单克隆抗体；定位；表达分布

中图分类号: 

• S855.3