摘要： 为建立用于 H13亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）快速检测的 TaqMan 探针实时荧光RT-PCR方法，试验基于GISAID数据库公布的624株H13亚型AIV血凝素（HA） 基因的保守结构域，设计特异性引物和TaqMan探针，对引物终浓度和探针终浓度配比及退火 温度、延伸时间等扩增条件进行优化，确定最优反应条件，从而建立针对H13亚型AIV的TaqMan 探针实时荧光 RT-PCR 检测方法，并对该方法的灵敏度、特异性及重复性进行验证。结果显 示：引物浓度和探针浓度分别是 0.5 μmol/L 和 0.25 μmol/L，退火温度和延伸时间分别是 60 ℃ 30 s时扩增效果最佳；该方法仅对 H13亚型 AIV 有特异性扩增，与其他亚型 AIV、传染性法氏 囊病病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性支气炎病毒和新城疫病毒等均无交叉反应；其检测限 为 6.27拷贝/μL；批内和批间试验的变异系数均低于 2%；野鸟临床粪便样品检测结果与病毒 分离鉴定符合率为 100%。研究表明，建立的 H13 亚型 AIV 的 TaqMan 探针实时荧光 RT-PCR 检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性，为 H13亚型 AIV 的快速诊断和监测及科学防 控提供技术支持。

关键词: 禽流感病毒；H13亚型；实时荧光RT-PCR；野鸟

中图分类号: 

• S855.3