摘要： 为建立 H12 亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）实时荧光定量 RT-PCR （RT-qPCR）检测方法，试验基于 GenBank已公布的 534株 H12亚型 AIV血凝素（HA）基因的保 守区域设计一对特异性引物和TaqMan探针，对引物和探针浓度、退火温度及延伸时间进行优 化，建立 H12亚型 AIV的实时荧光定量 RT-qPCR 检测方法，并验证该方法的特异性、灵敏度、 重复性等。结果显示：当引物和探针浓度分别为 0.5 μmol/L 和 0.25 μmol/L、退火温度 58 ℃时 扩增效率最佳；该方法与 H5亚型、H7亚型、H9亚型等其他亚型 AIV 以及新城疫病毒、传染性 支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、鸭坦布苏病毒等其他禽病病原均无交叉反应，检出限为 2.8拷贝/μL，组内和组间变异系数均低于 1%；该方法对 100份海鸥粪便样品和 30份动物攻毒 试验样品检测结果与病毒分离鉴定结果符合率为100%。研究表明，试验建立的H12亚型AIV 实时荧光定量RT-qPCR检测方法特异性好且具有较高的灵敏度和良好的重复性，可用于H12 亚型AIV的早期诊断和监测。

关键词: 禽流感病毒；H12亚型；实时荧光定量RT-PCR；TaqMan探针

中图分类号: 

• S855.3