摘要： 为深入研究TMEM182基因在鸡体内的功能和表现，试验采用原始生殖细胞介导 法，利用 CRISPR/Cas9 介导的 HMEJ 基因编辑技术，对体外培养的原始生殖细胞 TMEM182 基 因进行敲除，以期产生 TMEM182基因缺陷性腺嵌合体鸡。选择 3个 sgRNA 靶向 TMEM182基 因的第二外显子，利用 T7E1 进行基因打靶效率检测。对体外培养的 PGCs 进行外源基因 mCherry 定点插入，引起 TMEM182 基因插入突变，通过流式分选获得 mCherry+PGCs。将 mCherry+PGCs 注射到发育至 2.5 d 的受体鸡胚，观察外源 PGCs 的性腺整合情况。结果显示： TMEM182-sgRNA1 的打靶效率最高；通过将 sgRNA1 与模板质粒共转染 PGCs，得到能稳定表 达红色荧光的 mCherry+PGCs；孵化第 6 天，在受体鸡胚性腺能明显观察到发出红色荧光的 PGCs，最终孵化出 10只小鸡。研究表明：利用 CRISPR/Cas9技术对鸡 PGCs进行基因编辑，制 备性腺嵌合体鸡是一种高效、稳定的制备基因编辑鸡的方法。

关键词: 鸡；CRISPR/Cas9；PGCs；TMEM182基因；基因编辑

中图分类号: 

• S831.2