摘要： 研究旨在通过 CRISPR-Cas9 技术构建 DOT1L 基因敲除的鸡胚成纤维细胞系 （DF-1），并分析DOT1L基因敲除对J亚群禽白血病病毒（ALV-J）复制及其细胞信号通路的影 响，也为后续进一步研究DOT1L的生物学功能提供生物材料。研究首先利用CRISPR/Cas9基 因编辑技术构建 DOT1L基因敲除的 DF-1细胞系，分析野生型和敲除细胞对 ALV-J复制的影 响，再通过转录组测序技术对敲除细胞与野生型细胞的基因表达谱进行了差异分析。结果显 示：设计的 sgRNA 均具有 T7E1 酶切割活性且 sgRNA-1 切割活性最高。DNA 测序显示，筛选 DOT1L敲除的阳性细胞外显子区域分别缺失2个和4个碱基，导致移码突变产生。Western blot 验证DOT1L基因敲除的单克隆细胞的H3K79me2水平显著降低（P<0.05），并且DOT1L敲除显 著抑制ALV-J复制。RNA-Seq结果显示，与野生细胞系相比DOT1L敲除细胞系的差异表达基 因（DEGs）共有2 821个，其中上调基因1 384个，下调基因1 437个。DEGs的GO功能注释主要 与细胞成长代谢和生物过程的调节相关；KEGG通路富集分析主要集中在细胞黏附、ECM受体 和 Wnt途径等信号通路。综上，研究首次成功构建了 DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系， 并通过转录组测序分析和筛选 DOT1L 基因敲除细胞系的差异基因表达谱，这有助于理解 DOT1L基因在鸡胚成纤维细胞中的潜在作用，还为进一步探究鸡DOT1L的抗病毒天然免疫调 控功能提供重要的生物材料。
中图分类号:
