摘要： 研究旨在构建基因3型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus genotype 3，DHAV-3）YDF 株的第140代鸡胚化弱毒株Y140株与其第4代金定鸭源毒力返强毒株Y140/4R株的感染性克隆。 试验采用RT-PCR从DHAV-3基因组扩增3个重叠片段，在低拷贝质粒pWSK-29中进行装配，构 建Y140株和Y140/4R株的全长cDNA克隆质粒pY140和pY140/4R。将克隆质粒线性化，在体外 转录为 RNA；采用全长 RNA 转染 BHK-21细胞，并用鸭胚成纤维细胞（Duck embryo fibroblast， DEF）将拯救病毒进行传代，通过免疫荧光染色、遗传标记分析和雏鸭致病性试验对拯救病毒和亲 本毒株进行比较。结果显示：拯救病毒的基因序列和毒力表型未发生突变。研究表明，DHAV-3 弱毒株Y140株及其毒力返强毒株Y140/4R株的感染性克隆构建成功，为研究DHAV-3弱毒株 Y140株的毒力返强机制提供了技术平台。
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