中国家禽 ›› 2025, Vol. 47 ›› Issue (10): 52-59.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2025.10.008
傅彩霞,栗云鹏,刘海莹,张启龙,张 玮,李志军,刘晓冬*,周德刚*
摘要: 为建立一种同时检测沙门氏菌属及肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏 菌和鸡伤寒沙门氏菌的五重荧光PCR方法,研究根据沙门氏菌属invA基因、肠炎沙门氏菌SdfⅠ 基因、鼠伤寒沙门氏菌STM4495基因、鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌speC基因及鸡伤寒沙 门氏菌 glgC 基因设计 5 组特异性引物和探针,通过引物探针组的交叉验证和反应体系优化 建立五重荧光 PCR 反应体系,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评估和临床样品检 测。结果显示:建立的五重荧光 PCR 检测方法可特异性地鉴定出沙门氏菌属及肠炎沙门氏 菌、鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌;对5个基因的检测限分别为0.01 pg/μL (invA)、0.1 pg/μL(SdfⅠ)、0.1 pg/μL(STM4495)、0.01 pg/μL(speC)、0.01 pg/μL(glgC),灵敏度 高,重复检测稳定性好;对 100 份临床样品的检测结果显示,沙门氏菌五重荧光 PCR 与常规 PCR 均检出沙门氏菌 10株,并且对 4种血清型沙门氏菌的检测结果也完全一致。研究表明, 建立的五重荧光PCR方法不仅可以从属的水平准确检测沙门氏菌,还能够同时鉴定出肠炎沙 门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌,具有快速、特异、敏感、稳定等 优点,可用于禽沙门氏菌病的临床诊断和流行病学调查。
中图分类号: