摘要： 为制备毒害艾美耳球虫动力蛋白轻链（EnDLC）单克隆抗体，研究通过克隆与构建 EnDLC基因的原核表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达重组蛋白（rEnDLC），利用纯化与复 性后的rEnDLC免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合技术与间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆，鉴定 单克隆抗体亚类和特异性，应用单克隆抗体检测天然蛋白和虫体定位，并以多克隆抗体为对照。 结果显示：在上清和沉淀中，重组蛋白均有表达，能被6×His标签单克隆抗体和鸡抗毒害艾美耳球 虫、柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫阳性血清识别；获得2株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂 交瘤细胞株2D7和4G10，亚类分别为IgG2a和IgG1，纯化腹水效价分别为1∶512 000和1∶64 000； 2 株单克隆抗体与多克隆抗体均能特异性识别重组蛋白 rEnDLC 以及子孢子与配子体中的 EnDLC天然蛋白；IFA分析显示，rEnDLC鼠源多克隆抗体定位EnDLC于子孢子、第二裂殖子和配 子体的细胞质，单克隆抗体2D7和4G10均定位EnDLC于子孢子和第二代裂殖子的一端以及配子 体细胞质中，且在配子体中聚集成颗粒状。研究表明，研制的单克隆抗体2D7和4G10与毒害艾 美耳球虫EnDLC蛋白之间具有良好的反应性与特异性，为进一步研究DLC蛋白的功能提供了重 要工具。
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