中国家禽 ›› 2020, Vol. 42 ›› Issue (6): 15-20.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2020.06.003

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鸡lncRNA-CEPT8启动子验证 及活性核心区域筛选

金 晶1,2,余昕健3,靳 锴1,2,李婷婷1,2,张 晨1,2,左其生1,2*,李碧春1,2*   

  1. (1.扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州 225009; 2.江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州 225009; 3.中国科学院昆明动物研究所,云南昆明 650223)
  • 发布日期:2021-12-02
  • 作者简介:金晶(1995-),女,硕士研究生,研究方向为动物遗传育种,E-mail:819533811@qq.com

  • Published:2021-12-02

摘要: 研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR 检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域, PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观察。再构 建启动子系列缺失载体(pGL3-p1、pGL3-p2、pGL3-p3、pGL3-p4、pGL3-p5),分别转染DF-1细 胞后48 h检测双荧光素酶活性,分析缺失载体的启动活性。结果表明,lncRNA-CEPT8在鸡生殖 嵴中特异性高表达,pEGFP-lncCEPT8重组载体转染DF-1细胞后有绿色荧光。缺失载体pGL3-p4 与pGL3-p3相比,活性极显著下降(P<0.01)。研究明确了lncRNA-CEPT8上游-1 174~-1 bp处 为启动子,且-627~-429 bp是启动子核心区域,为进一步研究其表达调控机制提供理论依据。

关键词: 鸡;启动子;lncRNA;核心区域

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